Тору НишикаваКоманда опубликовала"Журнал Международного колледжа стоматологии"ИсследованияЧерез цепную мочевину (СТЗИндукция создания модели диабетической крысы, в которой индуцируется экспериментальный периодонтит с оксидом азота (Нет) Путь являетсяОсновные моментыИсследуйте механизм ухудшения пародонтоза при диабете, уделяя особое внимание анализу кровотока десен, генов, связанных с воспалением (фактор некроза опухоли)α/TNF-αИндуцированный монооксид азота/ ИНОСИзменения в экспрессии и маркерах нитритного стресса (нитротирозин).

резюме

« Цель » состоит в том, чтобы определить механизм обострения периодонтопатии при диабете, это исследование с помощью цепного мочевинозоба (СТЗИндукция создания модели диабетической крысы, в которой индуцируется экспериментальный пародонтит и оксид азота (Нет) Путь являетсяОсновные моментыРазвертывание дискуссии.

« Материалы и методы». 5 Чжоу БоулингSDКрысы, инъекции через брюшную полостьСТЗ(60 мг/кг) индуцирует диабет.СТЗИнъекции2 Через неделю второй коренной зуб справа от верхней челюсти (М2Завязка зубов и шеи нейлоновой нитью (3 - 0 Сургилон) для индукции экспериментального пародонтита, который является экспериментальной стороной; Другая сторона не обрабатывается, как контрольная сторона. Экспериментальная индукция пародонтита2 Через неделю сначала измеряют кровоток в тканях десен, а затем убивают крыс, анализируют экспрессию генов и гистологию тканей десен.

« Результат» кровоток десен на контрольной стороне диабетической крысы был значительно ниже, чем на контрольной стороне обычной крысы; Как нормальные, так и диабетические крысы, кровоток в тканях десен значительно увеличился после того, как периодонтит был вызван их соответствующими контрольными сторонами. Анализ экспрессии генов показал, что у нормальных крыс после индукции пародонтитаTNF-αХотя экспрессия генов имеет тенденцию к увеличению, статистических различий нет, иИНОСЗначительное увеличение экспрессии генов; Диабетические крысы, после индуцированного пародонтитаTNF-αиИНОСВыражение генов значительно увеличилось. Гистологическое обследование показало, что нормальный участок индукции пародонтита у крыс наблюдал только небольшое инфильтрацию воспалительных клеток, в то время как диабетические крысы видели значительное инфильтрацию воспалительных клеток в этой части. Дальнейший анализ экспрессии нитротирозина в тканях десен показал, что нитротирозин - положительные клетки были видны в месте индукции периодонтита у нормальных крыс, но у диабетических крыс значительно увеличилось количество нитротирозин - положительных клеток после индукции периодонтита.

« Заключение» Это исследование подтверждает значительное увеличение количества нитротирозиноположительных клеток в тканях десен на экспериментальной стороне диабетических крыс, предполагая, что нитростресс играет важную роль в диабетическом слиянии периодонтоза; В то же время предполагается, что подавление нитритного стресса может стать одной из стратегий лечения периодонтита, связанного с диабетом.

экспериментМатериалы и приборы

(i) Экспериментальные материалы

1. Экспериментальные животные:5 Чжоу БоулингSDКрысы

2. Диабетический индуктор: Цепочка мочевины (СТЗ)* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *Материал, индуцирующий периодонтоз: нейлоновые швы (3 - 0 Сургилон)* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *Наркотики: (пентобарбитал)

(2) Экспериментальные приборы

1. Омегавейв ФЛО-Н1лазерный доплеровский гемоглобиометрДля измерения кровотока в тканях десен

Омегавейв ФЛО-Н1лазерный доплеровский гемоглобиометр

Поток крови в тканях десен

2. Количественная флуоресценция в реальном времениПЦРприбор: количественный анализ экспрессии генов

3. Оптический микроскоп: для наблюдения и подсчета клеток после окрашивания тканевых срезов

4. Оборудование для хранения при низких температурах: емкости с жидким азотом (для быстрого замораживания тканей),-80℃Холодильник (для долгосрочного хранения тканей)

5. Нагревательная прокладка: используется для измерения кровотока десен при поддержании температуры прямой кишки крысы в37℃

Экспериментальный процесс

(1) Экспериментальное кормление животных и моделирование диабета

1. всеSDКрысы держатся при постоянной температуре (23±1.0℃Постоянная влажность (45 ± 10%) Комната для животных, принято12 Часовой цикл смены света и тьмы обеспечивает водопроводную воду через автоматические водопроводные установки.

2. Ввод в брюшную полость крысыСТЗ(60 мг/кг) для индуцирования диабета;СТЗИнъекции1 Проверьте уровень сахара в крови крыс через неделю≥200 мг/длКрысы были идентифицированы как крысы с диабетической моделью и включены в последующие эксперименты.

(2) Экспериментальная индукция пародонтита

СТЗИнъекции2 После недели для всех крыс (нормальных крыс)+Диабетические крысы) для обработки: в (0,5 мг/кгПод анестезией, второй коренной зуб справа от верхней челюсти (М2Зубы и шея обмотаны нейлоновыми швами (3 - 0 Сургилон() Старайтесь избегать повреждения десен и фиксировать узлы вблизи крышки рта сердца (эта сторона является экспериментальной стороной); Второй коренной зуб слева от верхней челюсти не обрабатывается (для контрольной стороны).

iii) Измерение кровотока в тканях десен

1. После индукции пародонтита, инъекции через брюшную полость (0,5 мг/кг- Анестезия крыс, введение лазерного доплеровского гематолога (ФЛО-Н1Зонд закреплен на экспериментальной и контрольной сторонах.М2На щеке десны прямо над ними.

2. Во время измерений крысы помещаются25℃Нагревающий коврик для поддержания температуры прямой кишки37℃Для записи значения кровотока (единицы:мл/мин/100г тканиВ)).

(4) Организационный сбор и обработка

1. Экспериментальная индукция пародонтита 2 Через неделю после инъекции в брюшную полость (1,5 мг/кг(Казнь крыс.

2. Сбор экспериментальной и контрольной сторон.М2Сосновая ткань десен на щеке: часть немедленно помещается в жидкий азот для быстрого замораживания, а затем переносится в- 80℃Хранение в холодильнике (для анализа экспрессии генов); Другая часть вместе с двусторонней тканью верхней челюсти снимается и помещается10%фиксация раствором формалина24 Часы (для гистологического анализа).

(v) Анализ экспрессии генов

1. использоватьРеагент TRIzolВсего из замороженной ткани десен.РНКА затем в целомРНКДля шаблона, используйтеСуперскрипт III RNase H-Reverse TranscriptaseсинтезcДНКА.

2. использоватьTaqMan универсальный ПЦР мастер-миксиТакманЗонд, вABI Призма 7000Проводится на приборахПЦРРеакция, условия реакции95℃ 1Минуты,52℃ 1Минуты,72℃ 30Секунда, всего40 Один цикл.

3. поГАПДХДля генов эндометрия, используяΔΔCtМетод вычисленияTNF-αиИНОСОтносительная экспрессия генов.

Экспериментальные выводы

Это исследование подтвердило значительное увеличение количества нитротирозиноположительных клеток в тканях десен на экспериментальной стороне диабетических крыс, предполагая, что нитростресс играет важную роль в диабетическом слиянии периодонтоза; В то же время предполагается, что подавление нитритного стресса может стать одной из стратегий лечения периодонтита, связанного с диабетом.