Приготовление перед подачей в резервуар.
1. Подготовка клеточной суспензии : предварительно культивированные клетки собираются из бутылочек или чашек Петри, смешиваются и получают 1 мл для подсчета клеток, чтобы убедиться, что плотность вакцинации подходит .
2, стерилизация оборудования : Проверьте, стерилизованы ли цистерны реактора, трубопроводы и электроды (например, обработка паров высокого давления при температуре 121°C), чтобы избежать микробного загрязнения
3, питательная среда и буферная жидкость : Подготовьте достаточное количество питательной среды и предварительно отрегулируйте pH в целевой диапазон (например, 7.2 - 7.4), охлаждайте резерв после стерилизации.
Вакцинация и первоначальное культивирование
1, Асептическая операция : В шкафу биобезопасности клеточная суспензия передается в реактор через асептический трубопровод, в то же время в сжатый воздух для вспомогательной смеси
2 Параметры :
Температура : Клетки млекопитающих обычно устанавливаются на уровне 37°C .
Растворимый кислород (DO) : Первоначальная установка 40%, поддерживается стабильностью при помощи газовой смеси (Onenenebk / Nneneneed / CO2®).
pH Контроль : Используйте перистальтический насос для добавления кислоты / щелочи или включения регулировки CO2z, поддерживая pH на уровне 6.5-7.0 (в зависимости от типа клетки) .
Мониторинг процесса воспитания
1, регулярный отбор проб : каждые 24 часа онлайн - отбор проб для определения плотности клеток, pH и концентрации метаболитов (например, глюкозы, молочной кислоты)
2, Поток плюс добавка : В зависимости от питательного потребления, поток с концентрированной питательной средой или конкретным компонентом (например, аминокислотой), продлевает логарифмический период роста клеток
3, контроль сдвига 8204
IV. Уборка и очистка
Конец культивирования: отключите систему автоматического управления, когда клетка вступает в период распада или когда накопление продукта достигает пика.
2, дренаж и сбор
3, Очистка и стерилизация : Промыть цистерны и компоненты очищенной водой, 0,1 м гидроксида натрия замочить на ночь, чтобы обеспечить отсутствие остатков
V. Меры предосторожности
1, асептическая эксплуатация : Весь процесс должен строго избегать загрязнения, дезинфекция перчаток и инструментов перед операцией
2, калибровка параметров : регулярная проверка pH, растворенных кислородных электродов, чтобы убедиться, что данные точны
3, Увеличить производство : Поэтапные операции могут быть увеличены непосредственно до промышленного масштаба (например, 12000L), но необходимо оптимизировать эффективность перемешивания и массопередачи
Благодаря вышеуказанным шагам можно эффективно завершить работу биореактора клеточной культуры, который подходит для производства моноклональных антител, вакцин и других биологических продуктов.