2025год9Май, из различных учреждений, таких как дерматология, Высшая школа медицины Киотского университетаНаоми КитаямаИсследовательская группа, вБиохимические и биофизические исследованияВ журнале был опубликован заголовокНацеление на PAR-2 при атопическом дерматите: доклиническая оценка нового ингибитора E6795Исследования. Исследование сосредоточено на атопическом дерматите (ADПатологический механизм, активирующий рецептор на новый протеаза2(ПАР-2Мелкие молекулярные ингибиторыE6795Проведена доклиническая экспертиза, чтобы выяснить, улучшается ли онаADСвязанные с воспалением, зудом и дисфункцией кожного барьера.

резюме

Синдромный дерматит (ADЭто хроническое воспалительное заболевание кожи, характеризующееся экземоидным повреждением кожи, сильным зудом и нарушением функции кожного барьера. Несмотря на появление новых методов лечения, многие пациенты по - прежнему сталкиваются с такими проблемами, как недостаточный контроль заболеваний, высокая стоимость лечения и рецидивы. Рецептор активации протеазы2(ПАР-2) ВADЧрезмерное выражение при потере кожи играет определенную роль в содействии воспалительной реакции, возникновению зуда и дисбалансу эпидермиса. Данное исследование предоставляетE6795Доклинические исследования свидетельствуют о том, что соединение представляет собой небольшую молекулу, предназначенную для нацеливания на вышеупомянутые патологические процессы.ПАР-2Ингибиторы. Киназа и фармакологический анализ подтверждают,E6795Избирательное подавлениеПАР-2В широком спектре киназы и фармакологических панелей наблюдалось очень низкое нецелевое взаимодействие. Кроме того,E6795Улучшилось в обеих моделях мышей.ADСоответствующие конечные показатели, включая снижение воспалительных реакций и инфильтрацию иммунных клеток; Пероральное введение снижает потерю влаги через кожу (ТЭВЛ), и2%Местные кремовые препараты улучшают гистологические проявления и симптомы зуда, связанные с барьерной функцией. Гистологическая экспертиза подтвердила,E6795После лечения инфильтрация воспалительных клеток уменьшается, а барьерная функция кожи усиливается. Результаты исследования показывают,E6795Избирательное подавлениеПАР-2Передача сигнала, мишень действует наADТри столпа патофизиологии- Да.Барьерная дисфункция, воспалительные реакции и зуд. В этом исследовании подчеркиваетсяE6795Как рентабельная модельADПотенциал местных лечебных препаратов.

экспериментМатериалы и приборы

(i) Экспериментальные материалы

1. Экспериментальные животные:11 - 12Чжоу БоулингНК/НГМыши,6 - 14Периодические самкиБАЛБ/сМыши,6 - 10Чжоу БоулингC57BL/6JМыши.

2. Реакторы и антитела:МЦ903АE6795АПАР-2ГиперидыSLIGKV - NH8322ndle;иСЛИГРЛ-НХ ₂Поджелудочно - протеаза, тромбиназа, карбоксиметилцеллюлоза, диметилсульфоны, уратан, различные флуоресцентные маркеры антител,ФЛИПРКальциметрические реагенты, коллагеназыIIТип,DNase I、10%формалин-Реактор для окрашивания ирана, реагент для окрашивания метамфетамина синего цвета и так далее.

3. Образцы клеток и тканей: зародышевые почки человекаHEK293Клетки, образцы кожи здоровых людей,ADОбразец кожи пациента с повреждением кожи.

(2) Экспериментальные приборы

ФДС6000Система флуоресцентного контроля,FACS ФортессаПоточный цитометр,ФлоуДжоПрограммное обеспечение, толщиномеры, системы измерения царапин,384Перфорированные полипропиленовые пластины,ЯКоллаген типа чёрный с прозрачным дном384Диафрагмовые пластины, вентиляционные клетки, микроскопы и системы анализа изображений,ASCHСканирование испаренияприбор для измерения потери влаги через кожу

АШ ВАПОСКАНприбор для измерения потери влаги через кожу

Экспериментальный процесс

1. Клеточный эксперимент:HEK293Клетки содержат3%Сыворотка крупного рогатого скота.DMEMВыращивание в питательной среде, вакцинация в384Задняя нагрузка на диафрагмуФЛИПРРеактор для кальция, добавьте различные концентрацииE6795Предварительная обработка30Минуты, затем добавьте поджелудочную протеазу или тромбин, черезФДС6000Системный мониторинг120Интенсивность флуоресценции в реальном времени в секундах с использованием четырех параметровлогистикаМодельный расчетIC₅₀Значения.

2. Модели животных и лекарства:

АМЦ903ИндукцияADМодель:БАЛБ/сУши у мышей непрерывно8Небольшое покрытие.МЦ903И, начиная с4С небес, ежедневно перорально содержитE6795Смесь карбоксиметилцеллюлозы, контрольная группа дает соответствующий растворитель.

АНК/НГСерьезныйADМодель: будет страдать дерматитомНК/НГМыши делятся5Группа, ежедневные локальные мазкиE6795Мазь, длительность7Дни, установите необработанные группы в качестве биологических контрастов.

3. Фармацевтическая оценка:

Функция кожного барьера: черезASCHСканирование испаренияприбор для измерения потери влаги через кожуИзмерение №0、3、7Утрата влаги через кожуЗначение(ТЭВЛ); Толщина ушей мышей измеряется ежедневно с помощью толщиномера.

АШ ВАПОСКАНприбор для измерения потери влаги через кожу

(с）第3 День и день7 Дневная потеря воды (ТЭВЛ) Результаты тестирования. По сравнению с контрольной группой растворителей,E6795Лекарства принимаются перорально.7 Дни могут заметно снижаться.ТЭВЛ. Данные ошибочно представлены в виде среднего ± стандарта (за исключением первого)8 Оральные дозы.n = 3Кроме, остальные группыn = 4В)).* После коррекцииП < 0,05По сравнению с контрольной группой растворителей (тест Даннета)

АПроверка зудящего поведения: в первой7день17 час. 00 мин.До следующего дня07 ч. 00 м.Поместите мышей отдельно в измерительную клетку.2По истечении часового адаптационного периода запись с помощью системы измерения царапин12Частота почесывания в течение часа.

АГистология и иммуногистологический анализ: в конце эксперимента была собрана ткань кожи ушей мышей, которая была закреплена формальдегидом и изготовлена после захоронения парафиновых пакетов5мкмОтрезать, провестиКомпания H&EКрашение (наблюдение за инфильтрацией воспалительных клеток и толщиной кожи), синее окрашивание метамфетамином (подсчет жирных клеток) иПАР-2Иммуногизированное окрашивание; Образцы кожи человека тоже делают.ПАР-2Иммуногенетическое тестирование.

АПоточный клеточный анализ: ткань кожи уха мыши ферментативным путем готовит одноклеточную суспензию, после окрашивания антитела флуоресцентным светомFACS ФортессаОбнаружение эозинофилов, нейтрофилов,CD4⁺TПроникновение подгрупп иммунных клеток, таких как клетки и щелочнофильные гранулоциты, выражается в абсолютном количестве клеток на квадратный миллиметр кожи уха.

4. Фармацевтическая динамика: обнаружение мышейE6795Степень свободной плазмы, доля свободной крови и доля крови-Отношение плазмы к массе, чтобы оценить характеристики поглощения и распределения по всему телу.

5. Селективный анализ: с помощью киназы селективной панели иСЕРЕПФармакология в сочетании с панелью, обнаружение1 мкми10 мкмПри концентрацииE6795Подавляющее действие на различные киназы, рецепторы, ионные каналы, оценка их нецелевой активности.

6. Статистический анализ: использованиеGraphPad Призма 7.03Программное обеспечение с использованием однофакторного дисперсионного анализа (односторонний ANOVA) СочетаниеДаннетМножественный сравнительный тест, чтобыα=0,05Для контрольного уровня данные усреднены±Стандартная ошибка (средний±SEM) Выражение.

Экспериментальные выводы

1. E6795Сильный и избирательный.ПАР-2Подавление активности, при измерении потока кальция в клетках.IC₅₀Значение6,56 нМА, даПАР-1Отсутствие ингибирующего эффекта и крайне низкая целевая активность в широком спектре киназы и фармакологических панелей.

2. Фармацевтическая индикацияE6795Перорально абсорбируется, хотя скорость связывания белков плазмы достигает97,5%Но небольшое количество свободных препаратов может играть терапевтическую роль.

3. Иммунизация подтвержденаADУ пациента развивается роговица в клетках.ПАР-2Выражение у более здоровых людей повышается.

4. вМЦ903ИндукцияADВ мышиной модели,E6795Пероральное и местное введение снижает инфильтрацию эозинофильных гранулоцитов, пероральное введение уменьшаетТЭВЛУлучшение барьерной функции кожи, местное введение может уменьшить толщину уха.

5. вNc/Nga ADВ мышиной модели,2% E6795Мазь уменьшает толщину кожи, гипертрофическую инфильтрацию клеток и почесать поведение, улучшает гистологическую производительность, связанную с дерматитом.

6. E6795Избирательное подавлениеПАР-2Сигнал, мишеньADТри основных ядра патофизиологии (воспаление, зуд, барьерная дисфункция) имеют потенциал в качестве рентабельного, минимально инвазивного местного терапевтического препарата.