Метод подсчета клетокА.От счетчика до автоматического счётчика клеток.

Многие распространенные эксперименты и тесты требуют, чтобы ученые сначала точно подсчитали количество или плотность клеток. Эти операции включают в себя простое поддержание клеточной культуры (например, клеточную передачу) и количественные эксперименты (например, qPCR). Калькуляция клеток может быть выполнена несколькими способами, и в этой статье будет представлена полная информация об этих методах, их преимуществах и недостатках.

1 Счётная доска / клетки кровиподсчётЦи

Использование клеток кровиподсчётЦиКогда, сначала очистите 70% алкоголя и фотобумагуподсчётЦиЗатем аккуратно поместите крышку на счетчик. При правильном размещении крышки можно наблюдать явление кольца Ньютона (концентрические кольцевые цветные узоры). Используйте детектор, чтобы взять небольшую часть клеточной суспензии и поместить детектор на край счетной пластины, чтобы суспензия поступала в счетную камеру через капиллярное действие. Если необходимо проверить клеточную активность, то перед добавлением в комнату подсчета следует перемешать тайваньский синий в клеточную суспензию в масштабе 1: 1.

Клетки кровиподсчётЦиЭто был ранний метод, предназначенный для получения точного подсчета клеток со специальной сеткой на счетчике. Как правило, большая ячейка составляет 1 мм × 1 мм и далее делится на небольшие ячейки 0,05 мм × 0,05 мм. Край счетной камеры предназначен для закрепления крышки на 0,1 мм над сеткой разметки, в результате чего образуется область известного объема.

После того, как микроскоп фокусируется на области в счетной комнате, используйтеСчётчикПодсчет клеток. Обычно используется область площадью 1 м2 (100 нанолитров) и подсчитывается с использованием объектива в 4 или 10 раз, но конкретный выбор зависит от размера клетки и плотности в суспензии. Этот процесс обычно повторяется на четырех различных участках площадью 1 квадратный миллиметр, и результат усредняется. При обнаружении клеточной активности следует отдельно считать живые и мертвые клетки, в которых из - за повреждения мембраны мертвые клетки окрашиваются в синий цвет.

Рисунок 1 КровьКлеткиСхема сетки счетчиков

Преимущества и недостатки

Ручной подсчет - это метод экономии бюджета, но он также является самым трудоемким и громоздким. Из - за человеческой ошибки, особенно при многократном непрерывном подсчете, надежность ниже. Кроме того, частые подсчеты могут привести к усталости глаз. Если лаборатория просто считает время от времени и не требует высокой точности, то клетки кровиСчётчикХороший выбор. Но этот метод кажется недостаточным, когда требуется частое подсчет, повышение точности или применение с высоким потоком. Кроме того, ручной подсчет затрудняет дифференциацию различных типов клеток в суспензии, если только тип клетки не сильно отличается по размеру или форме.

2 АвтоклеткиСчётчик

АвтоклеткиСчётчикЭто быстрая, простая и автоматизированная альтернатива ручному подсчету. Они основаны на клетках крови,СчётчикЭтот же принцип выполняется путем многократного подсчета клеток в известных областях и получения средних значений. Эти устройства также могут различать живые и мертвые клетки путем исключения красителей, таких как Taiban Blue. АвтоклеткиСчётчикЭто может быть автономное устройство или подключение к компьютеру для использования. большинствоСчётчикПомимо предоставления информации о количестве клеток, можно также подсчитать размер клеток и другую информацию.

Количество флуоресцентных клетокИ(Например, Luna - FL) ™ Количество двойных флуоресцентных клетокИМожно различать живые и мертвые клетки, а для подсчета клеток используются обычные красители (например, акридин - апельсин и йодид пропилена). Количество этих типов клетокИТакже хорошо зарекомендовали себя в подсчете клеток в культурах, которые могут быть загрязнены нефлеточными фрагментами (например, протоклетками), поскольку красители могут четко различать клетки.

Преимущества и недостатки

автоматическийСчётчикподходящийуниверсальныйКоличество клеток и анализ активности. Он прост в эксплуатации и имеет более низкую стоимость, что значительно уменьшает количество труда, подсчитываемого вручную. автоматическийСчётчикТочные и надежные, но могут быть проблемы при подсчете клеток нерегулярной формы, очень маленьких, чрезвычайно разреженных суспензий или содержащих множество различных, которые необходимо различать. Для большинства типов клеток и приложений, автоматическиСчётчикОбеспечивает высокую производительность счета.

3 КултерСчётчик

КултерСчётчикНе оптические приборы, а подсчет клеток путем измерения изменений сопротивления микроканалов. Сопротивление клеток выше, чем раствор суспензионного электролита, и они ненадолго увеличивают сопротивление, когда клетки проходят через канал, и это изменение увеличивается с увеличением размера клетки. CoulterСчётчикОперация аналогична автоматической.СчётчикОднако перед использованием необходимо выполнить тест на пустоту, а после использования провести промывку устройства.

Преимущества и недостатки

КуртСчётчикБыстрый и точный подсчет клеток разных размеров, поэтому часто используется для подсчета клеток крови в больницах. Тем не менее, он не может отличить живые клетки от мертвых и точно подсчитать клетки, которые образуют кластеры. Кроме того, требования к его содержанию выше.

4 проточный цитометр

Поточный цитометр обычно используется для более детального клеточного анализа и оснащен флуоресцентными методами обнаружения маркированных внутриклеточных компонентов. Не все проточные цитометры способны подсчитывать клетки, но проточные цитометры с функцией измерения объема обеспечивают очень точный подсчет клеток и могут различать типы клеток по маркированным флуоресцентным антителам.

Преимущества и недостатки

Поточный цитометр является мощным, но дорогостоящим, как правило, от $40 000 до $100 000 и более, поэтому редко используется для обычного подсчета клеток.

5 Другие методы подсчета клеток

Спектрометрия иногда используется для оценки плотности клеток.Степень. Из - за мутности клеток, по мере увеличения плотности клеток, свет, проходящий через чашку Петри, уменьшается. Однако, поскольку спектрометр не подсчитывает клетки напрямую, измеряет только абсорбцию, а другие переменные в суспензии могут влиять на абсорбцию, этот метод не является надежным.

Культивирование является еще одним методом подсчета, который применяется только к клеткам, которые образуют колонию (например, бактерии). После того, как клеточная суспензия разбавлена и выделена в чашку Петри, количество колоний подсчитывается для расчета плотности клеток исходной суспензии. Но из - за необходимости ждать роста колоний метод культивирования является самым медленным.

Автономные клеточные счетчики: более точные подсчеты приводят к более качественной науке

Точечные организмы предоставляют вам множество высокоточных полностью автоматических клеточных счетчиков, в том числе счетчик открытого поля, флуоресцентный счетчик клеток, автоматический счетчик бактерий и широкий спектр расходных материалов. Если у вас есть какие - либо потребности, пожалуйста, свяжитесь с нами!