Техническая инструкция по набору для обнаружения ELISA

BS - 4938 Растения 1.5 - дифосфатнуклеотид карбоксилаза (RuBisco) Набор реагентов ELISA 96T / 48T

Обзор продукта

Этот комплект предназначен для количественного определения in vitro активности нуклеоза - 1,5 - дифосфатной карбоксилидазы / оксигеназы (RuBisco) в образцах тканей растений, клеток и связанных с ними жидкостей. Фермент является ключевым ферментом цикла Кальвина фотосинтеза растений, активность которого напрямую влияет на скорость фотосинтеза и процесс оптического дыхания. В этом наборе используется метод иммуноадсорбции (ELISA) с двойным антитело - заполнителем, который обладает высокой чувствительностью и специфичностью.

Принцип обнаружения

В комплекте используется двухступенчатая таблетка с двумя антителами:

Предварительно завернутые целевые ферменты в образцах, захваченных микропористыми пластинами, устойчивыми к монорезистентности RuBisco

Добавьте HRP - маркер для обнаружения образования антител « антитело - антиген - ферментный антител» комплекс

После очистки добавьте красочный субстрат TMB

После окончания реакции энзимометр измеряет поглощение (OD) на длине волны 450 нм

Концентрация RuBisco в пробах положительно коррелирует с OD

Состав комплекта

Условия сохранения компонентов

Предварительно завернутая микропористая пластина 12×8 отверстий 4°C

Стандартная продукция (6 градиентов концентрации) 0,3 мл х 6 труб - 20°С

Антитела фермента 15 мл 4 °С

Буфер для стирки 20× 50 мл комнатная температура

TMB Светопоглощающие жидкости A / B 15 мл 4 °С каждый

Конец жидкости 15 мл комнатная температура

Образцовый разбавленный раствор 30ml 4°C

Обработка образцов

Образец ткани

Выберите 0,1 г ткани, добавьте 1 мл экстракта льда в ванну равномерного раствора

10000g 4°C центрифуга 10 минут

Взять очищающую жидкость для немедленного обнаружения или сохранения при температуре 80°C (чтобы избежать повторного замораживания и оттаивания)

Клеточные образцы

Собирайте осадки клеток, добавляйте крекинг экстракта

10000g 4°C центрифуга 10 минут

Проверьте жидкость.

Образцы сыворотки / жидкости

Помещение при комнатной температуре в течение 2 часов или 4 °C на ночь

1000г центрифуг 20 минут

Проверьте жидкость.

Внимание ‌:

Избегайте растворения крови в образцах

NaN3 подавляет активность HRP

Свежие образцы имеют приоритет, замороженные образцы избегают повторного замораживания и таяния

Шаг действия

Готовый реагент ‌: все реагенты сбалансированы до применения при комнатной температуре (20 - 25°С)

Добавить ‌:

Стандартное отверстие: 50 мкл стандартное изделие с различными концентрациями

Пробное отверстие: 50 мкл выборки

Пустое отверстие: не добавлять

Термофертильность: 100 мкл антитела L - ферментативного маркера на отверстие, светозащитная реакция 37°C 60 минут

Очистка: 350 мкл стиральной жидкости на отверстие, высыхание через 1 минуту, повторение 5 раз

Цвет ‌: Добавление 50 мкл субстратов A и B на отверстие, светозащитная реакция 37°C в течение 15 минут

Конец ‌: добавьте 50 мкл на отверстие, чтобы остановить жидкость

Измерение ‌: 450 нм OD в течение 15 минут с помощью энзимометра

Итоговый расчет

Нарисуйте стандартную кривую по концентрации стандартного продукта в горизонтальных координатах, а OD - в вертикальных координатах

Концентрация на стандартной кривой по значению OD выборки

Концентрация выборки = измеренная концентрация × кратное разбавлению (если таковое имеется)

Показатель производительности

Диапазон обнаружения: 18 - 650 U / L

Чувствительность: 5 U / L

Коэффициент вариации в партии: < 10%

Коэффициент межгрупповой вариации: < 15%

Меры предосторожности

Срок годности комплекта 6 месяцев, хранение при 2–8 °C

Реакторы разных партий не смешиваются.

Сохранение светонепроницаемой жидкости

Нечистка может привести к ложному положительному результату.

Концовка жидкости содержит коррозионное вещество и требует защиты при эксплуатации

Все отходы обрабатываются как биологически опасные.

Требуемые приборы

Ферментный маркер (450 нм фильтр)

Прецизионный переносчик (0,5 - 1000 мкл)

Термокамера 37°C

Стиральная машина (необязательно)

Вихревой смеситель

Примечание: Для использования в научных исследованиях, вышеуказанные материалы для справки, не в качестве экспериментальной основы, конкретно проконсультируйтесь с техническим учителем является или бренд - дилер.

Тяньцзинь Беншэн всегда рассматривал контроль качества как жизнь предприятия и стремился к постоянному повышению конкурентоспособности предприятия. В своей деятельности компания всегда придерживается: соблюдать закон, строго соблюдать закон, относиться к себе снисходительно, осмелиться взять на себя дух предпринимательства в качестве стандарта, с отличным качеством и отличным обслуживанием для поддержания и расширения рынка, в большей степени удовлетворять потребности клиентов. Выигрыш с клиентами - наша цель развития.