Инструкция по экспериментальному применению комплекта реагентов ELISA для эндотелиальных факторов роста A (VEGF - A) кровеносных сосудов человека

BS - 9809 Человеческий эндотелиальный фактор роста A (VEGF - A) Набор реагентов ELISA

I. ОБЗОР ПРОДУКТА

В этом наборе используется метод иммуноадсорбции с двойным антитело - заполнителем (ELISA), предназначенный для обнаружения концентрации VEGF - A в образцах сыворотки крови человека, плазмы, тканевой симметрии, клеточной культуры. Только для научного использования.

II. Состав комплекта реагентов

Предварительная упаковка состоит из микропористой пластины ‌: 12 отверстий × 8 (спецификация 96 отверстий) или 12 отверстий × 4 (спецификация 48 отверстий), а предварительная упаковка захватывается антителами против VEGF - A.

Стандартный продукт ‌: Замороженный сухой порошок, для которого требуется двойное разбавление после повторного растворения раствором стандартного продукта (рекомендуемый градиент концентрации: 10, 3,33, 1,11, 0,37, 0,12, 0,04, 0 нг / мл).

Обнаружение антител - HRP ‌: антитело против VEGF - A, маркированное пероксидазой хрена.

Промывочный буфер ‌: концентрат 20×, разбавляемый дистиллированной водой по нажатию 1: 20.

Подводный раствор ‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌››‌‌›: TMB Цветовой раствор A / B, смешивается

Конечная жидкость ‌: раствор 2M.

Образцовый разбавленный раствор ‌: используется для разбавления проб высокой концентрации.

Плоская мембрана ‌: 2 шт. для уплотнения микропористой пластины при нагревании и размножении.

III. Принцип эксперимента

VEGF - A связывается с предварительно упакованным захваченным антителом, образуя комплекс « антитела - антиген»; После добавления маркера HRP для обнаружения антител образуется « структура заполнителя». После стирки удалите несвязанное вещество, добавьте TMB субстрат яркого цвета (синего), после прекращения реакции жидкость становится желтой. Длина волны 450 нм измеряет поглощение света (OD), концентрация прямо пропорциональна значению OD.

IV. Экспериментальные шаги

Образец готов ‌

Сыворотка / плазма: центрифугирование для удаления частиц, чтобы избежать растворения крови; 2 - 8°C Сохранение в течение 48 часов, долгосрочное хранение требует - 20°C / - 80°C (чтобы избежать повторного замораживания и оттаивания).

Клеточная очистка: центробежный забор очищения, чтобы избежать высокой концентрации протеаза.

Готовность реагента ‌

Промывочный раствор: при кристаллизации при комнатной температуре концентрата промывочного раствора, после растворения в водяной ванне 40°C разбавляется по шкале 1: 20.

Стандартная продукция: после повторного растворения вдвое больше, чем разбавление, в настоящее время используется.

Фундамент: жидкость TMB A / B 1: 1 смешивается, чтобы избежать сохранения света.

Операционный процесс ‌

Добавление проб: 100 мкл стандартного продукта / образца на отверстие, инкубация при температуре 37°C в течение 90 минут.

Очистка ‌: сбрасывать жидкость в сухом отверстии, замачивать ее моющим раствором в течение 1 минуты / раз, повторять 3 раза.

Добавьте обнаруженное антитело ‌: 100 мкл HRP на отверстие с маркированным антителом, инкубация при температуре 37°C 60 минут.

Мойка ‌: Синхронная вспышка 2.

Цвет ‌: Добавление 90 мкл ТМБ в основание на отверстие, при температуре 37°C, чтобы избежать инкубации в течение 15 - 20 минут.

Конец ‌: Добавьте 100 мкл на отверстие, чтобы определить значение OD в течение 30 минут после смешивания.

Результаты расчетов ‌

Стандартная концентрация продукта (нг / мл) является горизонтальной координатой, а значение OD - вертикальной координатой для построения стандартной кривой.

Концентрация рассчитывается на основе метаболической кривой OD выборки, умноженной на кратное разбавление.

V. ПРИМЕЧАНИЯ

Сохранение реагента ‌: неиспользованный комплект должен быть защищен от света 2–8 °C, срок действия 6 месяцев; Стандартные продукты повторного растворения могут быть разделены на замораживание, чтобы избежать повторного замораживания и таяния.

Обработка проб ‌: Избегайте использования содержащихся образцов и предотвратите активность HRP.

Эксплуатационная инструкция ‌: Необходим перенос жидкости, чтобы избежать пузырьков; Для промывки необходимо предотвратить перекрестное загрязнение.

Безопасность ‌: Концовка жидкости содержит сильную кислоту, необходимо работать в перчатках.

VI. Ожидаемые результаты

Чувствительность ‌: 1,54 пг / мл (фактически в соответствии с инструкцией).

Диапазон обнаружения ‌: Типичный диапазон составляет 3,12 - 200 пг / мл, а некоторые наборы расширены до 62,5 - 2000 пг / мл.

Повторяемость ‌: Коэффициенты вариации внутри / между пластинами < 10% и < 15% соответственно.

VII. Часто задаваемые вопросы

Q: Слишком светлый или слишком глубокий цвет?

A ‌ Корректировка кратности разбавления выборки или времени инкубации; Убедитесь, что материал свежий.

Q ‌: Линейная разность стандартной кривой?

А ‌ Проверьте операции повторного растворения, чтобы избежать пузырьков; Замена всасывающей головки экструдера.

Примечание: Выше только для справки, этот продукт предназначен только для научного использования, не как фактические данные, эксперимент должен строго следовать инструкциям или консультироваться с техническим учителем.

Тяньцзинь Беншэн всегда рассматривал контроль качества как жизнь предприятия и стремился к постоянному повышению конкурентоспособности предприятия. В своей деятельности компания всегда придерживается: соблюдать закон, строго соблюдать закон, относиться к себе снисходительно, осмелиться взять на себя дух предпринимательства в качестве стандарта, с отличным качеством и отличным обслуживанием для поддержания и расширения рынка, в большей степени удовлетворять потребности клиентов. Выигрыш с клиентами - наша цель развития. Бенсон! Ваш доверенный партнер. Мы готовы искренне сотрудничать с вами, чтобы создать лучшее будущее.