Техническая инструкция по набору для обнаружения гамма - интерферона человека (IFN - гамма) ELISA

BS - 0033 Человеческий комплект для гамма - интерферона (IFN - гамма) ELISA

I. Принцип обнаружения

В этом наборе используется тест на иммуноадсорбцию фермента (ELISA) методом двойного антитело - заполнителя. Античеловеческие IFN - гамма - моноклональные антитела предварительно упаковываются в микропористые пластины, последовательно добавляя образцы, стандартные продукты и биометрические маркеры для обнаружения антител, образуя антитело - антиген - ферментный антитело - комплекс. После промывки добавьте стрептопенициллин (Streptavidin - HRP), маркированный пероксидазой хрена, в сочетании с цветом через основание TMB. Глубина цвета коррелирует с положительной концентрацией IFN - гамма в образце, и для количественного анализа используется ферментометр для измерения абсорбции (OD).

II. Состав комплекта реагентов

Компонент 96 отверстий Настройка 48 отверстий Условия хранения

Предварительно упакованные микропористые пластины 12 x 8 12 x 4 2 - 8°C

Стандартные изделия для замораживания и сушки 1 трубка 1 трубка 2 - 8°C (после повторного растворения - 20°C)

Антитела, маркированные биотином 100 мкл 100 мкл L 2 - 8°С (светозащита)

Стрептизон - HRP 100 мкл L 100 мкл L 2 - 8°C

Образцовый разбавленный раствор 30ml 15ml 2–8°C

Буфер для стирки 20× 20ml 10ml 2–8°C

TMB Подводная жидкость 10 мл 5 мл 2 - 8 °С

Конечная жидкость 10 мл 5 мл 2 - 8°С

Пленка 4 шт. 2 шт. комнатная температура

III. Требования к выборке

1. Тип выборки

Сыворотка / плазма ‌: Используйте EDTA или гепарин для антикоагуляции, чтобы избежать растворения крови.

Клеточная культура верхняя очистка ‌: центробежное удаление частиц, чтобы избежать повторного замораживания и таяния.

Другие биологические жидкости ‌: например, спинномозговая жидкость, груднобрюшная вода, необходимо уточнить после обнаружения.

2. Обработка проб

Степень разбавления ‌: сыворотка / плазма рекомендуется 1: 5 разбавление (образец: разбавленный раствор = 1: 4), клеточная очистка рекомендуется 1: 2 разбавление.

Условия хранения ‌: Краткосрочное (7 дней) 2 - 8°C сохранение, долгосрочное должно быть раздельно заморожено в - 80°C (чтобы избежать повторного замораживания и оттаивания).

IV. Экспериментальные шаги

1. Готовность реагента

Промывочный раствор: 20× концентрат разбавляется дистиллированной водой до 1× рабочего раствора (например, 20ml концентрат + 380ml воды).

Стандартный продукт для повторного растворения ‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌

Градиентное разбавление ‌: Возьмите 7 труб EP, каждая из которых добавляет 500 мкл разбавленного раствора, передайте 500 мкл из материнской жидкости в одну трубку, смешанную, в свою очередь, удваивая разбавление (пример: 1000 → 500 → 250 → 125 → 62.5 → 31.25 → 15.625 пг / мл).

2. Образцы и теплообразование

На отверстие добавляется 100 мкл стандартного продукта или разбавленного образца (рекомендуется повторное тестирование).

37°C Избегает фототермического размножения в течение 90 минут, уплотнительная мембрана уплотнена.

3. Мойка

Выбросьте жидкость из отверстия и промывайте ее 3 раза стиральным раствором 1×, каждый раз погружаясь в течение 1 минуты и высушивая.

4. Цвет и конец

К каждому отверстию добавляется 100 мкл биометрических маркеров антител (предварительно разбавленных раствором для антител 1: 100), при температуре 37 ° C избегайте фототермального размножения в течение 60 минут.

После промывки в каждое отверстие добавляется 100 мкл стрептомицин - HRP (предварительно разбавленный разбавленным раствором ABC 1: 100), а при температуре 37 ° C избегает фототермического размножения в течение 30 минут.

После промывки в каждое отверстие добавляется 100 мкл TMB донного раствора, при 37°C избегается блеска в течение 15 - 20 минут.

Добавление 50 мкл на отверстие прекращает реакцию жидкости (раствор преобразуется из синего в желтый).

5. Измерения

ОД длины волны 450 нм (опорная длина волны 570 - 630 нм) измеряется энзимометром в течение 30 минут.

V. Расчет результатов

Стандартная концентрация продукта в качестве горизонтальных координат, значение OD в качестве вертикальных координат для построения стандартной кривой (четыре параметра соответствуют).

На основе значения OD выборки фактическая концентрация рассчитывается с помощью уравнения регрессии, и если образец разбавлен, его нужно умножить на кратное разбавления.

VI. Показатели эффективности

Показатели параметров

Чувствительность 1,0 pg / ml

Диапазон обнаружения 15.63 - 1000 пг / мл

CV < 10% в доске точности

Коэффициент утилизации 83% - 113%

Специфика не пересекается с людьми IL - 2, IL - 4 и т.д.

VII. ПРИМЕЧАНИЯ

Хранение реагента ‌: неиспользованная пластина должна быть запечатана и сохранена при 2–8 °C, чтобы избежать влаги; Базовая жидкость TMB должна быть защищена от света.

Обработка проб ‌: Избегайте использования гемолитических, высоколипидных образцов крови; Образцы с высокой концентрацией требуют предварительного эксперимента для определения кратности разбавления.

Оперативная инструкция ‌:

При добавлении образца избегайте пузырьков, головку пистолета необходимо заменить.

Время термического размножения строго контролируется в установленных пределах, чтобы предотвратить испарение.

Контроль качества ‌: Каждая партия экспериментов должна иметь пустое отверстие (S0) и отрицательный контроль.

Советы по безопасности ‌: для прекращения содержания кислоты в жидкости необходимо использовать перчатки; Обработка отходов с учетом биологической опасности.

VIII. Срок действия

Набор реактива действителен в течение 6 месяцев при 2–8 °C, после вскрытия стандартный продукт рекомендуется упаковать и заморозить до 20°C.

Примечание: Выше только для справки, этот продукт предназначен только для научного использования, не как фактические данные, эксперимент должен строго следовать инструкциям или консультироваться с техническим учителем.

Инструкция по экспериментальному использованию набора реагентов ELISA для белого мезонина человека 1 (IL - 1) Bensheng всегда рассматривал контроль качества как жизнь предприятия, стремясь к постоянному повышению конкурентоспособности предприятия. В своей деятельности компания всегда придерживается: соблюдать закон, строго соблюдать закон, относиться к себе снисходительно, осмелиться взять на себя дух предпринимательства в качестве стандарта, с отличным качеством и отличным обслуживанием для поддержания и расширения рынка, в большей степени удовлетворять потребности клиентов. Выигрыш с клиентами - наша цель развития. Бенсон! Ваш доверенный партнер. Мы готовы искренне сотрудничать с вами, чтобы создать лучшее будущее. Набор Бенсона