Техническая инструкция по набору для тестирования ELISA

BS - 9843 Пероксидаза глютатина 4 (GPX4) Набор ELISA

Обзор продукта

В этом наборе используется двухступенчатый метод иммуноадсорбции фермента с двойным антителом (ELISA) ‌ для количественного определения концентрации пероксидазы глютатина 4 (GPX4) в образцах сыворотки крови человека, плазмы, тканевой симметрии, клеточного крекинга и клеточной культуры. GPX4 является ключевым членом семейства пероксидазы глютатина, которая очищает липидные пероксиды от прототипа глютатина (GSH), играя центральную роль в подавлении смерти железа, поддержании целостности клеточной мембраны и антиоксидантного стресса.

Принцип обнаружения

Двойной антитело - эксцентриситет ‌: Пакет связывается антителом с GPX4 в образце, биотин - маркированные антитела образуют комплекс, стрептопенициллин - аффин, отмеченный пероксидазой хрена (HRP), катализирует цветовую реакцию, интенсивность проявления цвета пропорциональна концентрации GPX4 в образце ‌

Специфичность ‌: Специфическая идентификация GPX4 без перекрестных реакций с аналогами для обеспечения точности обнаружения ‌

Состав комплекта

Спецификация / описание компонентов

Предварительно упакованная микропористая пластина с 96 отверстиями, содержащая античеловеческие антитела GPX4

Стандартный замороженный сухой порошок, рекомбинантный человеческий белок GPX4, растворимый в разбавленном растворе перед использованием

Биотин маркирует антитело жидкость, HRP маркирует антитело против человека GPX4

Яркий субстрат (TMB) жидкость, 3,3 ', 5,5' - раствор тетраметилдифениламина

Раствор 2М серной кислоты

Промывочный буфер 20×концентрат, содержащий Твен - 20

Буфер разбавленной жидкости для разбавления проб высокой концентрации

Прозрачная пленка для уплотнения микропористой пластины

Обработка и сохранение образцов

Тип образца ‌: сыворотка крови, плазма крови, тканевая симметрия, клеточный крекинг, клеточная культура и т. Д. ‌

Обработка ‌:

Сыворотка / плазма: центрифугирование после затвердевания при комнатной температуре (3000 rpm, 10 минут), взятие очищения.

Организационная симметрия: 10% симметричного раствора приготовлено из физиологического соленого раствора, центробежное очищение.

Клеточная крекинговая жидкость: центрифуга после крекинга (15000 rpm, 10 минут), взять очищение.

Условия хранения ‌: Краткосрочное (7 дней) 2 - 8°C сохранение, долгосрочное (> 7 дней) должно быть раздельно установлено - 20°C замораживание, чтобы избежать повторного замораживания и таяния ‌.

Шаг действия

Стандартное разбавление: разбавление стандартного продукта до 1000 путем разбавления образца pg/mL、500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.63 pg/mL，0 pg/mL Для пустого контроля ‌.

Добавление проб: 100 мкл стандартного продукта или образца на отверстие, инкубация при температуре 37°C в течение 90 минут.

Смывка ‌: Выбросьте жидкость в отверстии, каждое отверстие заполняется стиральной жидкостью, после 30 секунд покоя выбрасывается, повторяется 5 раз, высушивается.

Антитела, маркированные биотином: 100 мкл на отверстие с биомаркированным антителом, инкубация при температуре 37°C 60 минут.

Добавьте цветной субстрат ‌: добавьте 90 мкл TMB субстрата на отверстие и избегайте инкубации при температуре 37°C в течение 15 - 30 минут.

Конечная реакция ‌: на отверстие добавляется 50 мкл концентрирующей жидкости, после смешивания измеряется поглощение света.

Итоговый расчет

Настройка прибора ‌: длина волны энзимометра 450 нм (опорная длина волны 630 нм).

Обработка данных ‌: Используйте стандартную концентрацию продукта (pg / mL) в качестве горизонтальных координат, значение OD в качестве вертикальных координат, рисуйте стандартную кривую. Концентрация выборки рассчитывается с помощью кривых уравнений, умноженных на разбавленное кратное ‌.

Чувствительность ‌: 7,69 пг / мл, диапазон обнаружения 15,62 - 1000 пг / мл ‌.

Меры предосторожности

Перекрестная реакция: не происходит перекрестной реакции с аналогами GPX1, GPX2, GPX3.

Оперативная инструкция ‌:

Мойка должна быть чистой, чтобы избежать воздействия остаточной жидкости на результаты.

Время яркости контролируется в течение 15 - 30 минут, избегая чрезмерной яркости, приводящей к искажению данных.

Образцы избегают повторного замораживания и таяния, чтобы предотвратить разложение белков.

Контроль качества ‌: Для каждой партии экспериментов рекомендуется установить двойное повторное измерение, значение CV < 10% является квалифицированным ‌.

Условия хранения

Неоткрытый набор реагентов: 2 - 8°C светонепроницаемый консервант, срок действия 6 месяцев.

После вскрытия: стандартные изделия, антитела, субстраты и другие компоненты в соответствии с инструкциями требуют раздельного хранения, чтобы избежать повторного замораживания и таяния ‌.

Настоящая инструкция предназначена только для научных целей и не предназначена для клинической диагностики. Перед операцией внимательно прочитайте полную инструкцию и соблюдайте нормы безопасности лаборатории.

Примечание: Для использования в научных целях, вышеприведенная информация для справочных целей.

Человеческий глютатин пероксидаза 4 (GPX4) ELISA Набор реагентов Bensheng всегда рассматривал контроль качества как жизнь предприятия, преследуя непрерывное повышение конкурентоспособности предприятия. В своей деятельности компания всегда придерживается: соблюдать закон, строго соблюдать закон, относиться к себе снисходительно, осмелиться взять на себя дух предпринимательства в качестве стандарта, с отличным качеством и отличным обслуживанием для поддержания и расширения рынка, в большей степени удовлетворять потребности клиентов. Выигрыш с клиентами - наша цель развития.