Инструкция по набору для тестирования ELISA для крыс с соевым изотопом (Daidzein)

BS - 8567 Испытания ELISA для крыс с соевым изотопом (Daidzein)

Обзор продукта

В этом наборе используется метод конкурентной ферментативной иммуноадсорбции (ELISA), предназначенный для количественного определения содержания соевых элементов (Daidzein) в биологических образцах, таких как плазма крови крыс, сыворотка крови или тканевая симметрия. Соевый зоозин является природным изофлавоноидным соединением, обладающим биологической активностью, такой как антиоксиданты, противовоспалительные и регулируемые иммунитеты, и широко распространен в бобовых растениях. Проверка его содержания имеет решающее значение для фармакологических исследований и оценки питания. Этот набор основан на принципе специфичности комбинации антигена - антитела и обеспечивает высокочувствительное тестирование с помощью усиления сигнала ферментативного маркера, подходящего для обычного лабораторного анализа.

Состав комплекта

Предварительная упаковка состоит из микропористой пластины: 96 отверстий (12 × 8 отверстий), пластина может быть разобрана, пакет содержит соевый гетерогенный антитело.

Стандартная продукция: 6 градиентов концентрации (0,13 - 61,02 нг / мл), замороженная сухая порошкообразная, перед применением растворяется в растворе, разбавленном стандартным продуктом.

Ферментный маркер: Конкурентный антиген, маркированный пероксидазой хрена (HRP), коричневый светонепроницаемый для сохранения.

Яркий субстрат: раствор TMB, бесцветная прозрачная жидкость.

Концовочная жидкость: раствор серной кислоты 2М, используемый для прекращения реакции.

Стиральная жидкость: 20×концентрированный буфер, который необходимо разбавлять деионизированной водой для использования.

Образцовый разбавленный раствор: используется для регулирования концентрации образца до диапазона обнаружения.

Пленка уплотнительной пластины: 2 шт. для уплотнения микропористой пластины.

Инструкция: 1 экземпляр.

Условия хранения

Неоткрытый набор реагентов: 2 - 8°C светонепроницаемый, срок действия 12 месяцев.

После вскрытия: стандартные изделия, маркеры ферментов и цветные субстраты должны быть разделены на замораживание (- 20°C), чтобы избежать повторного замораживания и таяния; Микроводырочные пластины сухие и герметичные.

Запрещается замораживать концентрированный промывочный раствор для предотвращения выделения кристаллов.

Обработка образцов

Образцы плазмы / сыворотки крови: центрифугирование сразу после сбора (3000 rpm, 10 минут), взятие очищающей жидкости, сохранение - 80°C. Избегайте растворения крови.

Организационная симметрия: называется взять ткань, добавить физиологический раствор (1: 9 w / v) симметричный раствор, центробежный экстракт очищающей жидкости.

Примечание: соевыозиды в образце могут присутствовать в связываемом состоянии, и для повышения чувствительности к обнаружению рекомендуется гидролиз бета - глюкоза. При мутности образца требуется центрифуга (5000 rpm, 10 минут) или фильтрация (0,22 мкм мембраны).

Экспериментальные шаги

1. Готовность реагента

Смывной раствор: 20× концентрат разбавляется до 1× деионизированной водой (например, 10 мл концентрата + 190 мл воды).

Стандартный градиент продукта: рефрижераторно - сухой стандартный продукт растворяется в стандартном разбавленном растворе, градиент разбавлен до 0,13, 0,39, 1,17, 3,51, 10,53, 61,02 нг / мл.

Разбавление выборки: разбавление испытуемого образца до предела обнаружения с помощью разбавленного раствора выборки (рекомендуется предварительно экспериментировать для определения кратности разбавления).

2. Образцы и инкубация

В каждое отверстие добавляется 100 мкл стандартного продукта или образца (с пустым отверстием только с разбавленным раствором).

В каждое отверстие добавляется маркер фермента 50 мкл, который легко смешивается.

Светоизоляция при температуре 37°C в течение 60 минут.

3. Мойка

Выбросьте жидкость из отверстия, добавьте 350 мкл стиральной жидкости на отверстие, высушите через 30 секунд после статического положения, повторите 5 раз и высушите.

4. Цвет и конец

В каждое отверстие добавляется 100 мкл ярко выраженной субстраты, а при 37 ° C инкубация проходит в течение 15 минут.

В каждое отверстие добавляется 100 мкл концевой жидкости, которая легко смешивается.

5. Измерения

Немедленно измерить поглощение (OD) с помощью энзимометра на длине волны 450 нм с опорной длиной волны 630 нм.

Итоговый расчет

Стандартная кривая рисуется: стандартная концентрация продукта (ng / mL) в качестве горизонтальных координат, значение OD в качестве вертикальных координат, соответствует четырехпараметрической логической кривой (рекомендуется использовать профессиональное программное обеспечение).

Расчет концентрации выборки: на основе значения OD выборки в уравнение стандартной кривой, умноженное на кратное разбавление для получения фактической концентрации.

параметры производительности

Чувствительность: предел обнаружения 0,13 нг / мл.

Точность: коэффициент вариации внутри пластины (CV) < 10%, межпанельный CV < 15%.

Коэффициент возврата: 80 - 120% (метод проверки: эксперимент по рекуперации с маркировкой).

Линейный диапазон: 0,13 - 61,02 нг / мл, коэффициент корреляции r² ≥ 0,98.

Специфичность: скорость перекрестной реакции с аналогичными структурными соединениями (например, красителем лигнином) < 5%.

Меры предосторожности

Оперативная инструкция: избегать контакта маркеров ферментов и цветных субстратов с ионами металлов; Измеряется в течение 30 минут после проявления цвета, чтобы предотвратить ослабление сигнала.

Контроль качества: Каждая партия экспериментов должна содержать стандартные кривые и образцы контроля качества (рекомендуемые высокие, средние и низкие концентрации).

Безопасность: останавливающая жидкость содержит сильную кислоту и должна работать в перчатках и защитных очках.

Обработка отходов: ферментативные отходы должны быть дезактивированы, а затем выброшены.

Часто задаваемые вопросы

Низкий сигнал: проверьте, недостаточно ли времени или температуры инкубации; Проверьте адекватность этапов стирки.

Высокие фоновые значения: Может быть, из - за отсутствия промывки или помех матрицы образца рекомендуется увеличить количество стирок или оптимизировать предвыборную обработку образца.

Стандартная кривая ненормальная: при повторном растворении стандартный продукт должен быть полностью смешан, чтобы избежать воздействия пузырьков на точность концентрации.

Примечание: Данный продукт предназначен исключительно для научного использования и не используется в качестве экспериментальной основы. Конкретные действия должны соответствовать описанию фактического комплекта.

Тестовый комплект ELISA для крыс Daidzein Tianjin Bensheng всегда рассматривал контроль качества как жизнь предприятия, стремясь к постоянному повышению конкурентоспособности предприятия. В своей деятельности компания всегда придерживается: соблюдать закон, строго соблюдать закон, относиться к себе снисходительно, осмелиться взять на себя дух предпринимательства в качестве стандарта, с отличным качеством и отличным обслуживанием для поддержания и расширения рынка, в большей степени удовлетворять потребности клиентов. Выигрыш с клиентами - наша цель развития. Бенсон! Ваш доверенный партнер. Мы готовы искренне сотрудничать с вами, чтобы создать лучшее будущее. Набор Бенсона