Экспериментальная инструкция по набору глютатин - редуктаза (GSR) ELISA для крыс

BS - 3507 Реактор ELISA для глутатиона - редуктаза (GSR) крыс

I. Принцип эксперимента

В этом наборе для тестирования активности глутатиона - редуктаза (GSR) у крыс используется метод комбинированной иммуноадсорбции (ELISA) с двойным антитело - заполнителем. Пакет антител GSR против крыс был помещен в микропористую пластину, и после добавления к образцу, который должен был быть протестирован, GSR в образце был соединен с пакетом антител. Затем добавляются маркированные биотином антитела для обнаружения, образующие комплекс « антитела - антигены - ферментные маркеры антитела». После добавления стрептомиопина (SABC), маркированного пероксидазой хрена (HRP), блеск ТМБ - субстрата был измерен на длине волны 450 нм для поглощения света (OD), и значение OD было положительно коррелировано с концентрацией GSR в образце.

II. Состав комплекта реагентов

Компонент 48 отверстий Настройка 96 отверстий Условия хранения

Предварительно упакованные ферментные пластины 8 × 6 8 × 12 2 - 8°C

Стандартные изделия (замороженные сухие) 1 шт. 1 шт. 2 - 8°С

Стандартная продукция / образец разбавленного раствора 10 мл 15 мл 2 - 8°С

Биотизированные антитела 60 мкл (100 ×) 120 мкл (100 ×) - 20 °С

Биотизированный раствор для разбавления антител 6мл 12мл 2–8°С

Композиты SABC 6 мл 12 мл 2 - 8°С

TMB Цветовая жидкость (A / B) 3 мл по 6 мл для предотвращения света 2–8 °С

Конечная жидкость 6 мл 12 мл 2 - 8°С

20×концентрат моющего средства 30мл 60мл комнатная температура

Пластинка 2 листа 4 листа комнатная температура

Инструкция в 1 экз -

III. Обработка образцов

Образцы сыворотки / плазмы крови:

Комнатальная температура всей крови статична в течение 2 часов или 4 ° C на ночь, 1000 г центрифуги в течение 20 минут, чтобы очистить.

Избегайте гемолитических или высоколипидных образцов крови, 2 - 8°C может храниться в течение 48 часов; Долгосрочное хранение требует - 20°C или - 80°C, чтобы избежать повторного замораживания и оттаивания.

Образцы тканей / клеток ‌:

После симметрии тканей или клеточного крекинга центрифуга очищается, а концентрация белка корректируется в рекомендуемый диапазон.

IV. Экспериментальные шаги

Стиральная жидкость ‌:

Разбавить концентрат 20× в 20 раз дистиллированной водой (например, 1мл концентрата + 19мл дистиллированной воды).

Стандартное разбавление ‌:

Возьмите 7 центробежных труб, помеченных 1 / 2, 1 / 4, 1 / 8, 1 / 16, 1 / 32, 1 / 64, пустых (Blank).

В каждую трубку добавляется 200 мкл стандартного продукта / образца разбавленного раствора, а в первую трубку добавляется 200 мкл стандартного исходного раствора, который смешивается и разбавляется шаг за шагом.

Образец и инкубация:

В каждое отверстие добавляется 100 мкл стандартного продукта или образца, а инкубация при температуре 37°C длится 90 минут.

Выбросить жидкость, промыть 3 раза (1 - 2 минуты на погружение).

Реакция ферментативного антитела ‌:

Каждое отверстие добавляется 100 мкл биогенно - детекторных антител (разбавленных 1: 100), а инкубация при температуре 37°C длится 60 минут.

Промыть 3 раза.

Реакция комплекса SABC:

В каждое отверстие добавляется 100 мкл комплекса SABC, который высиживается при температуре 37°C в течение 30 минут.

Промыть 3 раза.

Цвет и конец ‌:

В каждое отверстие добавляется 90 мкл ТМБ цветной жидкости (смесь эквивалента жидкости A / B), избегая света при 37°C инкубации в течение 15 минут.

В каждое отверстие добавляется 50 мкл концевой жидкости, которая измеряется сразу же после смешивания.

V. Расчет результатов

Стандартная концентрация продукта для горизонтальных координат (X), значение OD для вертикальных координат (Y), нарисовать стандартную кривую.

Концентрация GSR рассчитывается на основе значений OD выборки в уравнение стандартной кривой.

VI. ПРИМЕЧАНИЯ

Хранение реагентов:

Стандартные продукты, биогенные антитела должны быть сохранены - 20°C, чтобы избежать повторного замораживания и таяния; Другие компоненты сохраняются 2–8 °C.

Обработка проб ‌:

Избегайте использования гемолитических, гиперлипидных или мутных образцов; Образец ткани должен быть полностью равномерным.

Оперативная инструкция ‌:

Миграция должна быть точной, чтобы избежать перекрестного загрязнения; Потребность в стирке, остаточная жидкость влияет на результаты.

Калибровка прибора ‌:

Длина волны ферментометра должна быть откалибрована до 450 нм, а пустое отверстие - до нуля.

Безопасность ‌:

Концовочный раствор содержит серную кислоту, надевая перчатки и защитные очки во время работы.

VII. Ожидаемые результаты

Чувствительность: GSR может быть обнаружен до 0156 нг / мл.

Линейный диапазон: 0.156 - 10нг / мл.

VIII. Сфера применения

Этот комплект предназначен для количественного обнаружения GSR в сыворотке крови крыс, плазме крови, тканевом симметрии и растворе для клеточной культуры.

Совет ‌: Конкретные действия должны основываться на фактическом описании набора реагентов, перед экспериментом необходимо прочитать полное описание и подтвердить целостность компонентов.

Примечание: Выше только для справки, этот реактив предназначен только для научного использования, не как фактические данные, эксперимент должен строго следовать инструкциям или консультироваться с учителем техники.